牛I型膠原C端肽(CTX-I)ELISA檢測試劑盒現貨供應!
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檢測原理
試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被牛I型膠原C端肽(CTX-I)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并澈底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的牛I型膠原C端肽(CTX-I)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
樣品收集、處理及保存方法
1.血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2.血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。
3.細胞上清液:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4.組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。
5.保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20°C,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
1.酶標儀(450nm)
2.高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37°C恒溫箱
操作步驟
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4°C。
2.設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
3.待測樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本希釋液40μL;
4.隨后標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37°C水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37°C避光孵育15min。
操作注意事項
1.試劑盒保存在2-8°C,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正常現象,水浴加熱使結晶wan全溶解后再使用。
2.實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
3.預處理后的樣本無需稀釋,直接取10μL加樣即可。
4.嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
5.所有液體組分使用前充分搖勻。
6.本產品僅供科研實驗用,不做其它用途。
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