產(chǎn)品時(shí)間:2024-03-13
RIPA裂解液(組織/細(xì)胞)是一種主要用于從動(dòng)物組織和動(dòng)物細(xì)胞中抽取的可溶性蛋白的試劑。RIPA 組織/細(xì)胞裂解液是利用表面活性劑等來裂解細(xì)胞膜(包括核膜)。本試劑提取的蛋白為可溶性總蛋白
RIPA裂解液(組織/細(xì)胞)
【產(chǎn)品規(guī)格】 :20ml /100ml
【儲(chǔ)存條件】 :RIPA裂解液4℃保存,PMSF -20℃保存
【有效期】 :12個(gè)月
【產(chǎn)品簡(jiǎn)介】 :
RIPA裂解液是一種主要用于從動(dòng)物組織和動(dòng)物細(xì)胞中抽取的可溶性蛋白的試劑。
RIPA 組織/細(xì)胞裂解液是利用表面活性劑等來裂解細(xì)胞膜(包括核膜)。本試劑提取的蛋白為可溶性總蛋白。
本產(chǎn)品僅供科研實(shí)驗(yàn)用,不做其它用途!
【使用說明】 :
如發(fā)現(xiàn)RIPA有沉淀,請(qǐng)放室溫半小時(shí)或者常溫水浴使沉淀溶解。
根據(jù)使用量,取每1mL RIPA加入10uL PMSF,使PMSF的最終濃度為1mM,混勻備用(PMSF現(xiàn)用現(xiàn)加)。
1、樣品前處理:
a)對(duì)于貼壁細(xì)胞:去除培養(yǎng)液,用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。按照6孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細(xì)胞充分接觸。
b)對(duì)于懸浮細(xì)胞:離心收集細(xì)胞,按照6孔板每孔細(xì)胞量加入150-250uL裂解液的比例加入裂解液,用手指輕彈懸浮細(xì)胞以充分裂解。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多,必需分裝成50-100萬細(xì)胞/管,然后再裂解。
c)對(duì)于組織樣品:把組織剪切成細(xì)小的碎片。按照每20mg組織加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當(dāng)減少裂解液的用量) 。用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
2、后處理:
將裂解后的樣品10000-14000g離心3-5分鐘,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)的蛋白濃度測(cè)定、SDS-PAGE、Western blotting和免疫沉淀等操作。
【注意事項(xiàng)】 :
本試劑為強(qiáng)烈型裂解液,可以提取核蛋白,但在提取核蛋白的同時(shí),也會(huì)將基因組一并釋放出來,若細(xì)胞量多會(huì)造成細(xì)胞裂解液粘稠:此時(shí)可以直接加入蛋白上樣緩沖液,煮沸再離心,離心后直接上樣電泳;若想測(cè)定濃度,可加入少量 SDS(1%),煮沸后離心測(cè)濃度。本系列蛋白提取試劑所提取的蛋白由于含有去污劑,所以不適合使用Bradford 蛋白濃度測(cè)定試劑盒,請(qǐng)選擇BCA法或者Lowry法檢測(cè)蛋白濃度。
如果需要檢測(cè)和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白,則可以通過超聲處理打碎打散粘稠狀物,隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
RIPA裂解液(組織/細(xì)胞)
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