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重組牛腸激酶(rb-EK) 分子生物試劑

重組牛腸激酶(rb-EK) 分子生物試劑

產品時間:2023-05-23

簡要描述:

重組牛腸激酶(rb-EK):重組蛋白的產生是應用了重組DNA或重組RNA的技術從而獲得的蛋白質。體外重組蛋白的生產主要包括四大系統(tǒng):原核蛋白表達,哺乳動物細胞蛋白表達,酵母蛋白表達及昆蟲細胞蛋白表達。生產的蛋白在活性和應用方法方面均有所不同。根據(jù)自身的下游運用選擇合適的蛋白表達系統(tǒng),提高表達成功率。

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重組牛腸激酶(rb-EK):重組蛋白的產生是應用了重組DNA或重組RNA的技術從而獲得的蛋白質。體外重組蛋白的生產主要包括四大系統(tǒng):原核蛋白表達,哺乳動物細胞蛋白表達,酵母蛋白表達及昆蟲細胞蛋白表達。生產的蛋白在活性和應用方法方面均有所不同。根據(jù)自身的下游運用選擇合適的蛋白表達系統(tǒng),提高表達成功率。


高特異性

1)特定的蛋白酶,切割前面含有四個天冬氨酸的賴氨酸羧基端位點:天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 賴氨酸 (DDDDK)

2)不含其他蛋白酶,無非特異性切割

圖一:SDS-PAGE檢測結果,純化的腸激酶一個單一的主帶

圖二:0.1U的EK作用于50µg底物0min,10 min,20 min,30 min,40 min,50 min,60 min后的SDS-PAGE分析

活性:1U定義:在25℃,12h~16h之內,將0.50mg融合蛋白在25mM Tris-HCl8.0緩沖液中切割95%所需的酶量。

酶切條件:按照酶活性定義,重組EK酶切條件舉例:25mM Tris-HCl 8.0體系中:

融合蛋白濃度        0.1-1mg/ml (蛋白總量0.50-1.0mg)

重組EK用量          1.0-2.0U

溫度                       25℃過夜酶切,或完全酶切需12h-16h。

常見影響腸激酶活性的因素:在>200mM 咪唑,或>200mM NaCl,或>5%甘油,酶切效果受影響。可參照以下推薦方法進行酶切:

1)為獲得理想酶切結果,請將樣品透析到25mM Tris-HCl 8.0緩沖液中,再進行酶切。

2)若不便透析,可將樣品稀釋,咪唑含量在100mM以下,NaCl濃度在50mM以下,甘油濃度小于5%以下進行酶切,酶的用量與蛋白的比例不變(即1U酶切0.5mg蛋白)。

3)如果樣品溶液中含有上述成分中的一種或多種,且不便去除,此時適當增加酶量或延長酶切時間,也可達到較好酶切效果。

穩(wěn)定性:可以在常溫下運輸,在37℃,可穩(wěn)定保存一周。

酶液可反復凍融數(shù)次,對酶活無影響。

來源及用途:本產品來源于重組大腸桿菌,用于去除位于蛋白質N-末端的融合蛋白,以除去不需要的融合標簽。

儲存條件:-20℃,避光防潮密閉干燥。

運輸條件:2~8℃運輸


重組牛腸激酶(rb-EK)

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