凝血酶(Thrombin)的用途
來源:牛血漿
性狀:白色或微黃色凍干粉
規格:1000U/支
保存:凍干粉4-8℃
純度:SDS-PAGE電泳純度≥95%(無蛋白酶)
比活:≥2000U/mgpr
使用方法:生理鹽水溶解使用,復溶后-20度凍存,避免反復凍融
用途:凝血酶時間檢測試劑(TT)配制、纖維蛋白原檢測試劑(FIB)配制、TB位點酶切、納豆激酶活力測定、尿激酶活力測定等,非臨床治療使用。
簡介:凝血酶(Thrombin)來源于牛血漿,分子量37KD,是由兩條肽鏈(31KD和6KD)通過二硫鍵組成的。凝血酶是凝血酶原(凝血因子Ⅱ)激活后形成的蛋白質水解酶,其催化纖維蛋白原(fibrinogen)水解掉A肽和B肽,由此形成纖維蛋白單體,單體進一步聚合。
由于凝血酶具有切割序列專一性強,水解效率高的特點,它被廣泛地應用于基因工程產品的開發,其應用之一是作為工具蛋白酶用于重組融合蛋白質的特異性斷裂,尤其適用于生物工程制藥業及基因工程、生物化學、分子生物學等研究。
凝血酶是一種廣泛用于切割標簽的蛋白酶,能夠有效切質量比僅為1:2000的蛋白。建議消化緩沖液:20mMTris-HCl緩沖液,150mM NaCl,pH8.0,于20℃到37℃之間切割0.3到16小時,1U可切割約0.1-0.5mg蛋白。
凝血酶最佳切割位點是X4-X3-P-R[K]-X1'-X2',這里X4和X3是疏水氨基酸而X1'和X2'是非酸性氨基酸,一些經常使用的識別位點L-V-P-R-G-S,L-V-P-R-G-F,和M-Y-P-R-G-N。在X4-X3-P-R-G-X2'之間切割比在4-X3-P-K-L-X2'更有效。其他識別位點是X2-R[K]-X1',這里X2或者X1'是甘氨酸,例如A-R-G和G-K-A,這里切割發生在第二個殘基后。在凝血酶切割位點和N末端標簽之間插入五個甘氨酸殘基可改善切,通過這一"甘氨酸連接肽"只需較少酶量就可達到完-全切割,而且也可以避免可能發生的錯誤切割。凝血酶可從切割產物中用p-氨基瓊脂糖親和純化,或者苯甲脒瓊脂糖移去。
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