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小鼠免疫組化組織切片的實驗
更新時間:2016-06-20   點擊次數:1240次

南京信帆生物專業提供免疫組化代測服務,有專業的生物科研實驗室,采用原裝試劑,結果準確,速度快,歡迎廣大老師和學生前來咨詢!

材料 二甲苯,酒精(100%,95%),EDTA抗原修復工作液(pH8.0,稀釋50倍使用),0.5M Tris-NaCl (TBS) pH7.4(稀釋10倍使用), DAB顯色液(臨用前配制:試劑盒A、B、C各50ul,于1ml水中混勻)。

 方法 

1. 石蠟切片置60℃烘箱中烘烤過夜

2. 二甲苯中脫蠟,梯度酒精入水(無水乙醇,95%酒精),浸泡蒸餾水中待用

3. 抗原修復 取500mlEDTA抗原修復工作液于1000ml燒杯中,在小功率電爐上加熱,至似沸微沸(為了防止脫片)。將組織切片緩慢放入燒杯。繼續加熱,保持液體在微沸狀態20分鐘。將燒杯移開火源,室溫下自然冷卻后取出切片,蒸餾水洗1次3分鐘,TBS洗2次每次3分鐘。

4. 每張切片加一滴或50ul 3%過氧化氫溶液,室溫下孵育10min,以阻斷內源性過氧化物酶的活性。 TBS沖洗3次,每次3min。

5. 除去TBS液,加一滴或50ul 一抗(滅活PLB免疫小鼠所得到的多抗,1:3000稀釋),陰性對照采用普通血清,室溫下孵育2小時,或4℃過夜。

6. TBS洗3次,每次5min,除去TBS液,每張切片加一滴或50ul polymer enhancer(試劑A),室溫下孵育20min,TBS沖洗3次,每次3min。

7. 除去TBS液,每張切片加一滴或50ul 過氧化物酶標記的抗鼠/兔聚合物(試劑B),室溫下孵育30min,TBS洗3次,每次3min。

8. 除去TBS液,每張切片加一滴或50ul 新鮮配制的DAB,顯色3-10min。

9. 自來水沖洗,蘇木素復染10min,水沖洗。0.1%的鹽酸分化,自來水沖洗,TBS返藍。 10. 不需脫水,直接用中性樹脂封片。

 注意事項 1.抗原修復時必須保證切片始終能浸泡在液體內,一定要等工作液冷卻后才能將切片取出

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