使用目的: 本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中抗鼠抗體(HAMA)表達。 實驗原理 本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人抗鼠抗體(HAMA)表達。用純化的人抗鼠抗體(HAMA)抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中抗鼠抗體(HAMA)相結合,經洗滌除去未結合的抗原和其他成分后再與HRP 標記的抗鼠抗體(HAMA)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),與CUTOFF 值相比較,從而判定標本中人抗鼠抗體(HAMA)的存在與否。 操作步驟 1. 編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照2 孔、陽性對照2 孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同) 2. 加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻, 3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。 4. 配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用 5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此重復5 次,拍干。 6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。 7. 溫育:操作同3。 8. 洗滌:操作同5。 9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15 分鐘. 10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。 11. 測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應在加終止液后15 分鐘以內進行。 |