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培養霉菌斜面轉接

如何讓霉菌產孢子？
一般微生物都會在逆境下產孢子，比如低溫、紫外照射等惡劣的生存條件，有的情況下，陽光照射也能促使產孢。不同的菌的產孢條件還不太一樣，要因菌而異，和培養基也有關?？梢哉艺蚁嚓P資料查查產孢培養基，可以試試水瓊脂培養基（直接在水中加瓊脂、無其他營養物質）。

操作步驟：
一、開箱檢查:

打開包裝箱，查看斜面是否破損，菌株編號與說明書是否一致。

二、實驗準備:

仔細閱讀菌株說明書，準備2個新鮮平板或斜面。

三、器材滅菌:

斜面試管表面消毒后，轉移至生物安全柜中，管口灼燒滅菌冷卻備用。接種鋤和接種鏟在酒精燈外焰翻轉灼燒滅菌3-5分鐘，冷卻備用，冷卻后用接種鋤在斜面上相距0.5cm處切兩條平行線（與試管垂直）。

四、切分斜面:

換接種鏟在兩條平行線之間相距0.5cm處切兩條平行線（與試管平行），形成0.5cm*0.5cm的小正方形菌塊。

五、霉菌轉接:

用接種鏟挑取菌塊平放到平板或斜面（固體瓊脂表面）上（菌塊正面朝上）。轉接多個平板或斜面，重復以上操作即可。

六、完成培養:

平板正放，斜面傾斜放置于霉菌培養箱中培養。（參照菌種說明書上的培養條件設置溫度）

（1） 實驗材料 

根霉，毛霉，黑曲霉，青霉，土豆瓊脂培養基，培養皿，載玻片，蓋玻片，鑷子，顯微鏡，小刀，U形管等。 

（2） 實驗步驟 

1、配置培養基：根據原料用量配置土豆培養基。配置時，先急火煮沸，在溫火加熱20min，若有渾濁出現，則需過濾，然后定容。包扎土豆培養基，甘油等其他用品。滅菌后取出備用2、培養小室準備及滅菌 在培養皿底部鋪一張略小于皿底的圓形濾紙片，濾紙片上依次放上“U”形載玻片擱架、載玻片、蓋玻片-四片，蓋上皿蓋，牛皮紙包扎，于恒溫干燥箱中121℃滅菌30min烘干備用；

2、瓊脂薄片制作：

a) 將稍微冷卻的培養基，倒在培養皿 中，做成薄平板。培養基應該要倒 得薄而均勻。注意無菌操作。

b) 用解剖刀將瓊脂薄平板切成邊長不大于1cm的瓊脂薄片

c) 用解剖刀將瓊脂薄片移至小室載玻片上（一個載玻片上方兩塊薄片）

3、取菌接種：用接種環挑取少量待觀察的霉菌孢子（霉菌菌種的表面輕輕刮取即可），接種于固體培養基邊緣，以便于霉菌生長。接種時只要將帶菌的接種環在載玻片上輕輕碰幾下即可。接種量要少，以免培養后菌絲過于稠密而影響觀察。

4、加蓋玻片：用無菌鑷子將皿內的蓋玻片蓋在瓊脂薄層上，用鑷子輕壓蓋玻片，使蓋玻片和載玻片之間的距離相當接近，但不能壓扁。蓋玻片不能緊貼載玻片，要彼此留有小縫隙，一是為了通氣，二是使各部分結構平行排列，易于觀察。

5、倒保濕劑：每皿倒入約2-3mL 20%的經滅菌處理的甘油，使皿內濾紙*濕潤，以保持皿內濕度，蓋上皿蓋。制成載玻片濕室。
6、正置培養：將平皿置于27℃霉菌培養箱中培養一周。

7、觀察： 將培養好的載玻片取出，置于顯微鏡下直接觀察。 

（3）實驗結果及分析 

實驗結果 

1.根霉：菌絲無隔，有假根、匍匐菌絲。假根著生處有向上直立的孢囊梗，其頂端膨大成孢子囊，底部為半球形囊軸。

2.毛霉：孢囊梗直接由菌絲出，頂端為球形孢子囊 

3.黑曲霉：菌絲有隔，氣生菌絲分化為分生孢子梗（無隔），頂端 膨脹為球狀頂囊。

4.青霉：菌絲有隔，分生孢子梗頂端不膨大，無頂囊，多次分枝成幾輪小梗，小梗頂端長孢子。分生孢子梗呈掃帚狀。