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線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ檢測試劑盒使用說明！

產(chǎn)品說明：

復(fù)合體Ⅰ（EC 1.6.5. 3）又稱 NADH-CoQ 還原酶或 NADH 脫氫酶，廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體中，是線粒體內(nèi)膜中zui大的蛋白復(fù)合物。該酶催化一對電子從 NADH 傳遞給 CoQ，同時可使 O2還原生成 O2-，是呼吸電子傳遞鏈上產(chǎn)生 O2-的主要部位。測定該酶活性，

不僅可以反映呼吸電子傳遞鏈（ETC）狀態(tài)，而且可以反映活性氧（ROS）生成狀態(tài)。復(fù)合體Ⅰ能夠催化 NADH 脫氫生成 NAD+，在 340nm 下測定 NADH 的氧化速率計算出該酶活性的大小。

試驗中所需的儀器和試劑：

紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 石英比色皿、研缽/勻漿器、丙酮、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、復(fù)合體的提取：

(1) 稱取約 0.1g 組織或收集 500 萬細(xì)胞，加入 1.0 mL 提取液，用勻漿器或研缽于冰上勻漿。

(2) 4 ℃ 600 g 離心 10min。

(3) 將上清液移至另一離心管中，4 ℃ 11000 g 離心 15min。

(4) 上清液即胞漿提取物，可用于測定從線粒體泄漏的復(fù)合體Ⅰ（此步可選做，可以判斷線粒體提取效果）。

(5) 在沉淀中加入 400µL 提取液，超聲波破碎（功率 20％，超聲 5 秒，間隔 10 秒，重復(fù) 15 次），用于復(fù)合體Ⅰ酶活性測定，并且用于蛋白含量測定。

線粒體呼吸鏈主要由線粒體呼吸鏈酶組成，線粒體呼吸鏈酶復(fù)合物缺陷是導(dǎo)致線粒體病的重要原因（約有30%-40%的線粒體疾病是由于線粒體呼吸鏈酶缺陷造成），線粒體病種類較多，通常采用線粒體基因組分析與線粒體呼吸鏈酶活性檢測的方式加以確診。
 

呼吸鏈的四種復(fù)合體可受不同抑制劑的影響阻斷其電子傳遞過程。其中異戊作用于復(fù)合體Ⅰ；萎銹靈作用于復(fù)合體Ⅱ；抗mei素A作用于復(fù)合體Ⅲ；CN﹣作用于復(fù)合物Ⅳ中的氧化型Cyt a3，CO作用于還原型Cyt a3。以上抑制劑可阻斷呼吸鏈的電子傳遞，引起機體迅速死亡。

線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ檢測試劑盒使用說明！