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緩沖溶液指的是由弱酸及其鹽、弱堿及其鹽組成的混合溶液,能在一定程度上抵消、減輕外加強酸或強堿對溶液酸堿度的影響,從而保持溶液的pH值相對穩(wěn)定。
在生化研究工作中,常常需要使用緩沖溶液來維持實驗體系的酸堿度。研究工作的溶液體系pH值的變化往往直接影響到研究工作的成效。如果“提取酶”實驗體系的pH值變動或大幅度變動,酶活性就會下降甚至*喪失。所以配制緩沖溶液是一個*的關(guān)鍵步驟。
緩沖溶液是無機化學及分析化學中的重要概念,緩沖溶液是指具有能夠維持PH相對穩(wěn)定性能的溶液。pH值在一定的范圍內(nèi)不因稀釋或外加少量的酸或堿而發(fā)生顯著的變化,緩沖溶液依據(jù)共軛酸堿對及其物質(zhì)的量不同而具有不同的pH值和緩沖容量。
常見組成:
常用作緩沖溶液的酸類由弱酸及其共軛酸鹽組合成的溶液具有緩沖作用。常見的緩沖體系有:
1、弱酸和它的鹽(如HAc---NaAc)
2、弱堿和它的鹽(NH3·H2O---NH4Cl)
3、多元弱酸的酸式鹽及其對應的次級鹽(如NaH2PO4---Na2HPO4)的水溶液組成。
而生化實驗室常用的緩沖系主要有、檸檬酸、碳酸、醋酸、酸、Tris(三羥甲基氨基甲烷)等系統(tǒng),生化實驗或研究工作中要慎重地選擇緩沖體系,因為有時影響實驗結(jié)果的因素并不是緩沖液的pH值,而是緩沖液中的某種離子。如硼酸鹽、檸檬酸鹽、鹽和三羥甲基甲烷等緩沖劑都可能產(chǎn)生不需要的化學反應。
硼酸鹽:硼酸鹽與許多化合物形成復鹽、如蔗糖。
檸檬酸鹽:檸檬酸鹽離子容易與鈣結(jié)合,所以存在有鈣離子的情況下不能使用。
鹽:在有些實驗,它是酶的抑止劑或甚至是一個代謝物,重金屬易以鹽的形式從溶液中沉淀出來。而且它在pH7.5以上時緩沖能力很小。
三羥甲基氨基甲烷:它可以和重金屬一起作用,但在有些系統(tǒng)中也起抑制作用。其主要缺點時溫度效應。這點往往被忽視,在室溫pH是7.8的Tris緩沖液,4℃時是8.4,37℃時是7.4,因此,4℃配制的緩沖液在37℃進行測量時,其氫離子濃度就增加了10倍。在pH7.5以下,其緩沖能力極為不理想。
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