信帆生物為大家分享:血液樣本在收集的時候有哪些小技巧
全血根據收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
標本的存放溫度及時間,血清、血漿及細胞分離的方法步驟也是分析前影響檢驗結果的重要因素。抽血后,血細胞因代謝需要,要消耗掉部分營養成分,故對這些成分進行測定時,需及時地離心以分離掉細胞成分。
采血前個體的準備情況,如空腹時間的長短、采樣時間的確定及采血時患者的姿勢;止血帶應用時間,輸液情況,體育運動,抗凝劑及穩定劑的選用;標本的處理等均可影響到某些檢驗指標的水平。故標本采集過程應標準化,以zui大限度地減少分析前誤差。
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一、不抗凝收集血清:
1、無添加劑的干燥空管收集:
血管內壁均勻涂有防止掛壁的藥劑(硅油)。它利用血液自然凝固的原理使血液凝固,等血清自然析出后,離心使用。主要用于血清生化(肝功、腎功、心肌酶、淀粉酶等)、電解質(血清鉀、鈉、氯、鈣、磷等)、甲狀腺功能、藥物檢測、艾滋病檢測、腫瘤標志物、血清免疫學檢測。
亦可直接用干燥EP管收集全血,充分靜置使得紅細胞充分自然凝固后,離心分離出血清待用或保存。
2、用促凝管收集:
采血管內壁均勻涂有防止掛壁的硅油,同時添加了促凝劑。促凝劑能激活纖維蛋白酶,使可溶性纖維蛋白變成不可溶性的纖維蛋白聚體,進而形成穩定的纖維蛋白凝塊,如果想快點出結果時,可采用促凝管。一般靜置半小時到1小時,直接離心分離出血清待用或保存,常用于急診生化。
3、含有分離膠及促凝劑的采血管收集:
管壁經過硅化處理,并涂有促凝劑可加速血液的凝固,縮短檢驗時間。管內加有分離膠,分離膠與PET管具有很好的親和性,確實起到隔離作用,一般即使在普通離心機上,分離膠能將血液中的液體成分(血清)和固體成分(血細胞)*分開并積聚在試管中形成屏障。離心后血清中不產生油滴,主要用于血清生化(肝功、腎功、心肌酶、淀粉酶等)、電解質(血清鉀、鈉、氯、鈣、磷等)、甲狀腺功能、藥物檢測、艾滋病檢測、腫瘤標志物、血清免疫學。
用促凝管的優點:
①、加速紅細胞的凝固,無需長時間的靜置;
②、帶有分離膠,有效的將血清分離出來,更好的避免溶血;
收集血清的缺點:
①、需要紅細胞的充分凝固,所需靜置時間較長;
②、分離出的血清相對較少,1ml全血不抗凝約只能分離出0.2-0.3ml血清。
二、抗凝收集血漿:
收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接離心分離血漿待用或保存。根據不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及枸櫞酸鈉。
1、肝素抗凝:
zui常用的抗凝劑,一般情況下對相關指標都不會有干擾,同時抗凝比例較大(抗凝劑:
全血=1:30),對血液基本沒有稀釋影響。
肝素是一種含有硫酸基團的粘多糖,帶有強大的負電荷,具有加強抗III滅活絲
氨酸蛋白酶的作用,從而阻止的形成,并有阻止血小板聚集等多種抗凝作用。肝素管一般用于生化及血流變的檢測,是電解質檢測的佳選擇,檢驗血標本中的鈉離子時,不能使用肝素鈉,以免影響檢測結果。也不能用于白細胞計數和分類,因肝素會引起白細胞聚集。
盡管用肝素的三種鹽抗凝所得電解質濃度無顯著差別,但肝素鋰還是被認為是的。這主要是人們認為肝素鈉可使鈉的測定值偏高,肝素銨可使血氨測定值偏高(尿素酶法測定)。
肝素可抑制分子生物學中常用的一些工具酶,如限制性內切酶、Taq酶等,可影響PCR
的實驗結果。可采用一些方法消除肝素的抑制效應,如利用肝素酶,或在分離白細胞后用緩沖液洗滌白細胞兩次以上等。然而,許多實驗工作者仍不愿意在進行分子生物學實驗時采用肝素作抗凝劑。
2、EDTA抗凝:
乙二胺四乙酸是一種氨基多羧基酸,可以有效地鰲合血液中的鈣離子,鰲合鈣會將鈣從
反應點移走將阻止和終止內源性或外源性凝血過程,從而防止血液凝固,與其他抗凝劑比較而言,其對血球的凝集及血細胞的形態影響較小,故通常使用EDTA鹽(2K、3K、2Na)作為抗凝劑。用于一般血液學檢查,不能用于血凝、微量元素及PCR檢查。
由于EDTA會螯合重金屬離子,用該抗凝劑的話,部分帶有金屬離子的大分子酶都會有大量損失,具體看客戶測定的指標來選擇,做血常規的話必須用EDTA抗凝。
3、枸櫞酸鹽抗凝:
檸檬酸鈉通過作用于血樣中鈣離子鰲合而起抗凝作用,國家實驗室標準化委員會(NCCLS)推薦為3.2%或3.8%,抗凝劑與血比例為1:9,主要用于纖溶系統(原時間、時間、活化部分時間、纖維蛋白原)。采血時應注意采足血量,以保證檢驗結果的準確性,采血后應立即輕輕顛倒混勻5-8次。由于抗凝比例較小(抗凝劑:全血=1:9),對血液有一定的稀釋,一般不建議。
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