新一代測(cè)序*Illumina宣布將拓展到醫(yī)學(xué)診斷領(lǐng)域。這家公司表示，它已組建了一個(gè)名為Grail的公司，希望利用Illumina的測(cè)序技術(shù)來(lái)實(shí)現(xiàn)癌癥篩查，直接檢測(cè)血液中的循環(huán)核酸。
這樣的檢測(cè)有時(shí)被稱(chēng)為“液體活檢（liquid biopsies）”，主要有兩種形式。Grail檢測(cè)的是循環(huán)腫瘤DNA（ctDNA）。另外一些人希望通過(guò)完整的細(xì)胞來(lái)診斷疾病和評(píng)估預(yù)后和療效，這些細(xì)胞被稱(chēng)為循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTC）。
CTC就像礦井中的金絲雀，警告著腫瘤的存在和分子特征，而此時(shí)疾病可能還沒(méi)有癥狀。據(jù)Janssen Diagnostics的研發(fā)主管Ron Mazumder介紹，它們的豐度與病人預(yù)后密切相關(guān)。“對(duì)于轉(zhuǎn)移性乳腺癌、結(jié)腸直腸癌和前列腺癌，你可以根據(jù)CTC的數(shù)量將病人分為預(yù)后較好或較差的。”
然而，找到它們談何容易，CTC是極其的。MilliporeSigma（Millipore與Sigma-Aldrich合并而成）的科學(xué)家Brian Hall表示：“在1 ml血液中，大約有700萬(wàn)個(gè)白細(xì)胞和10個(gè)CTC，這真的是大海撈針。”當(dāng)然，CTC的確切數(shù)量因病人而異，也隨著疾病進(jìn)程和治療而改變。
為此，研究人員和各家公司設(shè)計(jì)出幾種策略來(lái)幫助你撈針1。
正選和負(fù)選
由于CTC如此，大多數(shù)的CTC分析工具都采用兩種基本策略之一。在正選方法中，CTC是利用磁珠偶聯(lián)的抗體來(lái)濃縮的，這些抗體針對(duì)已知的CTC抗原。例如，Janssen Diagnostics的CellSearch檢測(cè)就利用了許多上皮性腫瘤都表達(dá)EpCAM的現(xiàn)象來(lái)富集CTC，這種檢測(cè)已被美國(guó)FDA批準(zhǔn)。之后用DAPI和細(xì)胞角蛋白對(duì)分離出的細(xì)胞進(jìn)行染色，以確保它們是CTC，并通過(guò)白細(xì)胞標(biāo)志物CD45復(fù)染，確定它們不是白細(xì)胞。
負(fù)選策略則利用抗體來(lái)去除那些不是CTC的細(xì)胞，例如，表達(dá)CD45的。對(duì)于某些腫瘤而言，這種策略可能更優(yōu)，因?yàn)椴灰蕾?lài)所表達(dá)的CTC抗原。
據(jù)美天旎的腫瘤學(xué)研究Olaf Hardt介紹，這兩種策略都不能地回收CTC。細(xì)胞聚集成團(tuán)，因此在負(fù)選過(guò)程中可能將寶貴的CTC與洗澡水一起倒掉。同理，正選策略也不可避免地會(huì)保留一些非CTC。因此，研究人員經(jīng)常將正選與負(fù)選相結(jié)合，在下游分析中配對(duì)使用，如顯微鏡和流式細(xì)胞儀。
當(dāng)然，這些策略依賴(lài)于生物標(biāo)志物的鑒定，這些標(biāo)志物定義了感興趣的CTC。并非所有CTC都是EpCAM陽(yáng)性的，非上皮性腫瘤，如黑色素瘤，就不是。那些經(jīng)歷了上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的腫瘤，也不是，賽默飛世爾的腫瘤產(chǎn)品主管Jason Johnson談道。
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