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免疫組化實(shí)驗(yàn)代測(cè)的實(shí)驗(yàn)原理
更新時(shí)間:2023-03-31   點(diǎn)擊次數(shù):1070次

免疫組化實(shí)驗(yàn)代測(cè)的實(shí)驗(yàn)原理


抗體和抗原之間的結(jié)合具有高度的特異性,免疫組織化學(xué)正是利用了這一原理。先將組織或細(xì)胞中的某種化學(xué)物質(zhì)提取出來,以此作為抗原或半抗原,通過免疫動(dòng)物后獲得特異性的抗體,再以此抗體去探測(cè)組織或細(xì)胞中的同類的抗原物質(zhì)。由于抗原與抗體的復(fù)合物是無色的,因此還必須借助于組織化學(xué)的方法將抗原抗體結(jié)合的部位顯示出來,以期達(dá)到對(duì)組織或細(xì)胞中的未知抗原進(jìn)行定性,定位或定量的研究

實(shí)驗(yàn)流程:
包埋
切片
免疫組化操作
抗體費(fèi)用
拍照
全景掃描
免疫組化分析

備注:

1、免疫組化要做預(yù)實(shí)驗(yàn)。
2、拍照倍數(shù)分100倍,200倍,400倍。正常情況下拍照是200倍3張,400倍3張。
3、全景掃描可看任意倍數(shù)。

常用免疫組織化學(xué)方法的原理如下:
1. 免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)
將已知抗體標(biāo)上熒光素,以此作為探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原,在熒光顯微鏡下觀察.當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后會(huì)發(fā)出一定波長的熒光,從而可以確定組織中的抗原定位或定量.
2. 免疫酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù)
是免疫組織化學(xué)研究中常用的技術(shù).基本原理是先以酶標(biāo)記的抗體與組織或細(xì)胞作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒,通過光鏡或電鏡,對(duì)細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原進(jìn)行定位或定性研究.
3. 免疫膠體金技術(shù)
就是用膠體金標(biāo)記一抗,二抗或其他的能特異性的結(jié)合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作為探針對(duì)組織或細(xì)胞內(nèi)的抗原進(jìn)行定性,定位或定量研究.由于膠體金的電子密度高,多用于免疫電鏡的單標(biāo)記或多標(biāo)記的定位研究.

常用染色方法
根據(jù)標(biāo)記物的不同分為免疫熒光法,免疫酶標(biāo)法,親和組織化學(xué)法,后者是以一種物質(zhì)對(duì)某種組織成分具有高度親合力為基礎(chǔ)的檢測(cè)方法。這種方法敏感性更高,有利于微量抗原(抗體)在細(xì)胞或亞細(xì)胞水平的定位,其中生物素—抗生物素染色法常用。


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