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線粒體提取試劑盒-血液樣本
更新時間:2022-11-30   點擊次數:528次

線粒體提取檢測試劑盒-血液樣本


本試劑盒可用于從血液中分離完整而純化的線粒體。其制備物,可以被用于細胞凋亡、信號傳遞、代謝和蛋白組學等的研究。但不適用于進一步DNA 提取。


樣本處理的方法

1. 血液處理:

血液要求:非肝-素鈉抗凝血,最好使用新鮮血液。對于陳舊血液,由于凍凝過程中冰晶已經對細胞核膜和線粒體膜產生損傷,所以線粒體得率會大大減少,并且完整性也會降低。

a. 對于無核紅細胞全血(如哺乳動物處周血),取血約5ml(適當分成幾管),加入3 倍體積的紅細胞裂解液(稀釋后的工作液,下同),混勻,800 × g 5 min 離心收集白細胞。加入1-2ml 紅細胞裂解液(稀釋后的工作液),吹打重懸白細胞,合并于一管中,800 × g 5~10 min 離心收集白細胞。此時如果白細胞有可見紅色,可再次用少量(0.5ml)紅細胞裂解液洗細一次。

b. 對于有核紅細胞全血(如禽類全血),取約200-300ul 全血,800 × g 5~10 min 離心收集全細胞,用生理鹽水或者PBS 清洗兩次,留沉淀去上清。清洗時請用去尖吸頭吹打。

2. 在收集到的細胞中,加入1.0 mL 冰預冷的白細胞裂解液重懸細胞,將細胞懸液轉移到小容量玻璃勻漿器內,0℃冰浴研磨20~40 次;

3. 勻漿物轉移到離心管,4℃,1000× g 離心5 min;

4. 取上清,加入一新的離心管中,4℃,1000× g 再次離心5 min(一共兩次離心,完整去核)。

5.取上清,加入一新的離心管中,4℃, 12,000 × g 離心10 min。離心后的上清含胞漿成分,可從中提取胞漿蛋白。將上清轉移到新離心管,線粒體沉淀在管底;

6. 在線粒體沉淀中加入0.5 mL 線粒體清洗液重懸線粒體沉淀,4℃,1000× g 離心5 min(再次去核);

7.取上清,加入一新的離心管中,4℃, 12,000 × g 離心10 min。棄上清,高純度的線粒體沉淀在管

底;

8. 用50 -100μL 線粒體保存液或合適的反應緩沖液重懸線粒體沉淀,立即使用或-70℃保存。


注意事項

為保證獲得完整及盡可能多的線粒體,勻漿條件要示:第一是全程低溫操作。第二是快速。第三,如有條件可將勻漿后的碎片在顯微鏡下觀察。


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